RESUMEN
El Frijol es uno de los principales granos de gran importancia económica, ya que se encuentra entre las principales granos de la canasta familiar de la población colombiana. El cultivo de este vegetal en el país presenta grandes pérdidas económicas (El Frijol: Cultivo, Plagas e importancia, Alvarado S. Juan S.1 Cód: 09331012), ya que hay muchos microorganismos que provocan que la planta no reciba los nutrientes necesarios hasta llegar al marchitamiento los principales Hongos fitopatógenos son los que dañan a ésta; actualmente se controla mediante agroquímicos, con implicaciones perjudiciales para los humanos, animales y el ambiente, Sin contar el esfuerzo, y el dinero que gastan comprando tan costosos aparatos y químicos. El uso de los cultivos de microorganismos antagonistas capaces de controlar a estos fitopatógenos, se tienen como un tipo de control alternativo, más eficaz y sin tener algún problema con el Ambiente, logrando que los alimentos sean mas sanos y cumpliendo los estándares internacionales de exportación de una agricultura limpia. el objetivo trazado es la implementación de un antagonista llamado trichoderma que lo que hace es inhibir el crecimiento de varios hongos patógenos de la planta, por lo que primero se tomaron varias muestras de ello En Carmen de viboral Antioquia(Oriente antioqueño) para aislar invitro los diferentes microorganismos presentes en un cultivo del oriente Antioqueño y comprobar el potencial biocontrolador de Trichoderma.
PROBLEMÁTICA
El frijol es cultivado en el Oriente antioqueño. Es uno de los granos más importantes de Antioquia ya que tiene mucha proteína (21.8g)y es bueno para la comunidad que quiere tener un orden alimenticio balanceado (SENSIBILIDADES DEL SECTOR CEREALISTA Y DE LEGUMINOSAS: FRIJOL, Bogota·, Noviembre de 2004, Fenalce: Administrador del Fondo Nacional Cerealista y, Fondo Nacional de Leguminosas). Es una de las plantas más vulnerables a los microorganismo presente en el ambiente como: Chalcodermus aenus, Cydia fabivora, Liriomyza sativae los cuales afectan directamente la calidad de producción(El Frijol: Cultivo, Plagas e importancia, Alvarado S. Juan S.1 Cód: 09331012). también varios fitopatógenos como lo son Fusarium sp Penicillium Rhizoctonia. (MICROORGANISMOS ASOCIADOS CON GRANOS DE FRÍJOL (Phaseolus vulgaris L.), VARIEDAD CARGAMANTO BLANCO, Claudia Nohemy Montoya-Estrada* y Jairo Castaño-Zapata**) y esto es lo que ha obligado a que los agricultores gasten una gran cantidad de dinero comprando agroquímicos sin tener ninguna remuneración. (A. Soto, agricultor en el carmen de viboral *antioquia* ) todas estas enfermedades han causado muchas pérdidas para los agricultores que los ha llevado a disminuir la cantidad de siembra en una parcela de muchos km2 (A. Soto Agricultor en el Carmen de viboral *antioquia*) para darle una posible solución a estas enfermedades se propone implementar por medio del control biológico un hongo antagonista llamado trichoderma que ha presentado un antagonismo con los hongos más incidentes en la planta y ocasionar una inhibición en los patógenos presente (MECANISMOS DE ACCIÓN DE Trichoderma FRENTE A HONGOS FITOPATÓGENOS Danay Infante*, B. Martínez*, e otros.La Habana ene.-abr. 2009)
JUSTIFICACION.
En la planta del frijol hay muchos microorganismos patógenos que limitan la productividad de esta, los hongos fitopatógenos, son quienes más lo atacan, 120 pequeños productores que siembran 101.559 hectáreas con una producción de 110.579 toneladas al año, que no son suficientes para abastecer el consumo interno,pero esto no es todo positivo, Colombia ha perdido competitividad con otros países, especialmente con la alta incidencia de enfermedades y plagas, que se agrava por el uso de semillas no nativas, lo cual exige un alto uso de plaguicidas para su manejo con consecuencias negativas, como la posible intoxicación por uso de estas, del frijol en Antioquia. estudios señalan que hay un hongo que provoca un antagonismo con varios de los patógenos y este hongo tiene como nombre Trichoderma, Ya que su actividad Biocontroladora tiene diferentes mecanismos de acción que regulan el desarrollo de los hongos fitopatógenos, su principal mecanismo de competencia es por espacio y nutrientes, ya que tiene una acción directa frente al hongo fitopatógeno, pero esta no es la unica forma, tambien se ve favorecido por la habilidad de colonizar la rizosfera (suelo añadido a la raíz de la planta), pero otros autores sugieren distintos mecanismos para su actividad biocontroladora, que incluya la secreción de enzimas y la producción de compuestos inhibidores contra los hongos fitopatógenos.
PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN.
¿Cómo varía el crecimiento in vitro de los hongos fitopatógenos de P. vulgaris Cuando se enfrenta con aislados de Trichoderma?
OBJETIVOS.
GENERAL:
Determinar el efecto antagónico in vitro de aislados de Trichoderma contra hongos fitopatógenos del frijol, como un posible biocontrolador.
ESPESIFICOS:
-Aislar e identificar hongos fitopatógenos presentes en el cultivo de frijol.
-Establecer el potencial biocontrolador de Trichoderma contra hongos fitopatógenos del frijol.Recolectar muestras de granos de frijol de un cultivo (Nororiente Antioqueño)
METODOLOGIA.
1. Muestreo del cultivo de frijol sano y malo
Este muestreo se hizo en el Carmen de viboral un municipio de Colombia localizado en la subregión Oriente del departamento de Antioquia Limita al Norte con Marinilla, Cocorná y El Santuario, al Este con Cocorná, al Sur con Sonsón y al Oeste con La Unión, La Ceja y Rionegro. las coordenadas son 06º05' latitud norte, 75º20' longitud oeste. Antes de empezar con la recolección se hicieron todas las preguntas necesarias al agricultor guía, (cada cuanto riegan el cultivo, si utiliza agroquímicos, que tipo de agroquímicos utiliza, como ha sido el avance de la enfermedad y que nota en ella la sintomatología) después se procedió al cultivo a registrar escrita y fotográficamente todo lo que se nota de la enfermedad y la sintomatología presente, si es posible contar las planta contaminadas. Prosiguió a la toma de muestras
-Muestras Aéreas:
- Vaina
- Fruto (frijol)
- Tallo
Estas muestras se recogieron con pinzas, y en el caso de cortar se utilizó un bisturí (Quit quirúrgicos)
2. Aislamiento del hongo fitopatógeno
2.1 Desinfección
Las muestras de la planta de frijol (tallo, raíz, hojas) se cortaron en trozos pequeños y finos después se colocó en NaClO al 1 % durante un minuto, en alcohol al 71 % durante otro minuto, después se puso en agua destilada estéril un minuto y se volvió a poner en agua destilada un minuto para que quede totalmente limpio de los reactivos, después se puso a secar durante un minuto para pasarlo al medio de cultivo.
2.2 Siembra
Se toman las muestras de la planta de frijol (tallo, raíz, hoja) ya desinfectado y se coloca sobre el medio de cultivo (PDA) previamente preparado y esterilizado.
2.3 Purificación
Después de aislar por primera vez el hongo de las cajas de Petri con las muestras; se debe de hacer por segunda vez, pero esta será del resultado del primero ya obtenido, para así, asegurar que no haya ningún otro tipo de microorganismo.
2.4 Identificación
Para esta identificación se debe describir microscópicamente,Realizando montajes con tinción azul de lactofenol y observando al microscopio para describir las estructuras que permitan identificar el género del hongo causante de la enfermedad esto se hace tomando una muestra del hongo fitopatógeno del frijol y se hace una identificación taxonómica comparando con documento e información de bases de datos de la Universidad de antioquia.
2.5 Aislamiento
Se tomarán los hongos fitopatógenos y Trichoderma que crecieron de la planta de frijol con el asa de aro se coge un trozo de cada hongo y se esparce sobre el medio de cultivo haciendo líneas horizontales y verticales se espera por 8 días para ver si crecieron.
2.6 PROTOCOLO DE INHIBICIÓN DE CRECIMIENTO (PIC)
Se coloca en una caja de petri una lámina de micelio 0,5 cm con el hongo se mide el radio de la caja de petri y el crecimiento de cada hongo.
3. Identificación del Hongo (fitopatógeno y Trichoderma)
Se tomará con una asa ya flameada el hongo, crecido en la caja de Petri, |después de haber tomado con el asa el hongo se frotara en el portaobjetos con la cantidad más mínima de azul de lactofenol (una gota), después de haber hecho esto se coloca el cubreobjetos y se tratará de que no queden burbujas dentro de este,y con una toalla se limpiara el excedente del (Azul de lactofenol) ya después de este proceso se toma la “placa” , se mira en el microscopio hasta hallar la muestra del hongo y así comparar la. imágenes de la estructura del hongo e identificarlo
4. Evaluación de la capacidad antagónica In-vitro de Trichoderma con hongos fitopatógenos
Se colocarán los hongos fitopatógenos y Trichoderma en conjunto en cajas de Petri y se tratarán tres controles, el control del Hongo (X,Y),(Y,Y),(X,X) y esto se le hará un seguimiento cada 24 Horas
4.1 se medirá el diámetro de la colonia del fitopatógeno y de trichoderma y se le harán observaciones diarias de la morfología comparando con los controles.
4.2 el potencial se determina como porcentaje de la inhibición de crecimiento (PIC) definido como: porcentaje de inhibición de crecimiento o …. micelial
